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        微孔板比色測定法在微量蛋白測定中的意義

        發布時間:2019-04-17

            目的,確立一種精確、迅速的微克級蛋白質測定法.方式 以考馬斯亮藍做為顯色劑,用酶標儀微孔板比色法與基本Bradford法、紫外吸收法、改良Lowry法同時測定98例樣版蛋白含量,并較為檢驗結論的關聯性.結果 改良微孔板Bradford法與常規Bradford法樣品的測定結論相近,二者有優良的關聯性.依據微孔板Bradford法是一種簡易、迅速、靈巧的蛋白質測量方法,特別是在適用于成批試品、微量試品的蛋白質含量測得。

            蛋白是水產品的關鍵組分,其含量測量在水產品加工及探討等方面運用極其普遍?,F階段,各蛋白含量迅速測量方法一般是在試管中進行反應并運用分光光度計測定,其操作流程較繁雜,解析成批試品時效率低,上述缺點在高通量篩選、檢驗等場合尤其突顯。

            為了克服該不足,實現蛋白含量的快速高通量測定,本研究基于Folin-酚法,利用96孔板作為反應器并配合酶標儀比色,建立了一種蛋白含量測定的微孔板方法并評價其合理性。該法測得樣品的蛋白含量與常規法結果無顯著性差異,反應在40-95min顯色穩定,標準曲線的線性相關系數R~2=0.8922,標準偏差范圍為4.06%-5.73%,檢測限為10μg。與常規法相比,微孔板法保持了Folin-酚法的準確性及穩定性,同時具備通量高、節約試品、試劑及測定時間等優勢,在蛋白高通量快速測定方面具有優點。

        微孔板圖片

            生物通聯合BioTek在2013年重磅推出#微孔板秘笈,為您介紹微孔板相關檢測產品的應用。4月我們將聚焦超微量檢測,介紹核酸定量方法及原理,原位微量BCA蛋白定量法,以及通過原位微量PicoGreen法定量DNA濃度。傳統標準的BCA 蛋白定量分析方法常規均應用試管或是微孔板開展檢測,根據對傳統方法進行改善,可應用BioTek 公司的Take3™ 超微量檢測板進行原位微量BCA法蛋白定量分析。

            歡迎索取《BioTek微孔板相關檢測產品應用手冊》

            介紹

            傳統標準的BCA 蛋白定量分析方法常規均使用試管或者微孔板進行檢測,根據對傳統方法開展改善,可應用BioTek 公司的Take3™ 超微量檢測板進行原位微量BCA法蛋白定量分析。待測蛋白樣品和BCA 工作緩沖液依照順序直接加進Take3™板的微量定量孔處、溫浴,應用Epoch™ 微孔板分光光度計進行檢測。和傳統標準BCA方法相比,該方法的蛋白檢測靈敏度有明顯的提高。相比Mini-BCA 分析法,該分析方法更加精確。

            BCA法是十分常用的蛋白質比色定量方法,許多試劑供應商都提供基于比色皿和微孔板的BCA 蛋白定量試劑盒。BCA蛋白定量法相對于其它比色定量法具有操作簡單、穩定、靈敏度高等優點。相對于蛋白質固有的290nm 吸收峰檢驗,BCA檢測法提高了蛋白檢測靈敏度和特異性,消除了核酸的干擾,核酸干擾在對細胞裂解物或別的生物樣品開展蛋白定量時總是一個難以避免的干擾。在堿性條件下,蛋白將Cu2+還原為Cu+, Cu+ 與BCA 試劑形成紫色絡合物,測定在562nm 處的吸收值,并與標準曲線對比,即可計算待測蛋白的濃度。

        微孔板圖片

            近些年開發的一些精密的檢測儀器,均可應用短光程、微量容積的樣品開展比色定量,例如NanoDrop該儀器內置了蛋白質290nm 直接定量法,這種方法能夠合理的節約使用樣品且操作簡單。在直接蛋白定量的基礎上,這些儀器還發展了蛋白質比色定量法,例如BCA 法。通過調整蛋白質和BCA 工作緩沖液的相對體積比,由原來的30:1 調整為1:1,這種微量定量方法變換校準曲線的工作范圍,使之更適合于微孔板或短光程檢測,這種方法叫Mini-BCA 法。

            因此對于這種根據把樣機加進檢驗基座上的設備而言,蛋白質和BCA 工作緩沖液務必先在1個額外的試劑槽里開展攪拌和溫浴,隨后能夠滴加進檢驗基座上開展監測。那樣會提升操作的多元性,提升了樣品的浪費。


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